クロマトグラフィーの記事は、たいていカラムで終わります。固定相を選び、移動相を組み、分離度を稼ぐ。そこまでが「分析」で、あとはソフトが面積を出してくれる ―― そういう順序で語られます。
しかし報告書に載る数字を最終的に決めているのは、カラムではなく積分です。そして積分は、信号を読み取る作業ではありません。どこからどこまでを1つのピークと呼び、その下にどんな線を引くかを決める作業です。決めごとである以上、決め方が変われば数字も変わります。
どのくらい変わるのか。2025年の査読論文に、同じピークを4つの積分モードで処理した実測値が載っています。真値 0.100 area% の不純物に対して、出てきた答えは 0.104 %・0.071 %・0.041 %・0.028 %。誤差にすると +4.2 % から −72.1 %。そして論文の図の説明にはこう書かれています ——
どの積分モードも、正しい値を返していない。
本記事は、この「決定」がどこで効いているのかを追います。前半は分離度とピーク形状という物理の話、後半は査察と規制の話です。両者は別の話題に見えて、実は同じ一点 ―― 積分は判断であり、判断には記録が要る ―― に収束します。
この記事の読み方
- 入門者の方は「積分は『読み取り』ではなく『決定』である」「同じピークを4通りに積分する」の2節だけで、この記事の主張はつかめます。
- 現場の分析者の方は、自前で計算した2つの表（垂直分割の誤差／谷が立つ最小分離度）と、「積分パラメータという『もうひとつのメソッド』」を中心に。
- QA・信頼性保証の方は、後半の FDA ウォーニングレター・MHRA・ICH M10 の節から読んでも成立します。
- 自前計算の表はモデルと条件を本文に明記しました。手元で再現できます。
積分は「読み取り」ではなく「決定」である
検出器が出しているのは、時間に対する連続した1本の信号です。そこには「ピーク」という区切りは存在しません。区切りを作るのは、次の3つの決定です。
- どこでピークが始まり、どこで終わったことにするか（開始点・終了点）
- その下にどんなベースラインを引くか（水平か、両端を結ぶ直線か、隣のピークの裾に接する線か）
- 重なった2本を、どうやって分けるか（垂直に落とすか、接線で切るか、谷で切るか）
このうち3番目が、実務でいちばん数字を動かします。主成分の隣に不純物が出たとき、両者の境界は物理的に存在しません。存在しない境界をどこに引くかを、分析者かソフトが決めているわけです。
決め方には名前が付いていて、主要なものは4つあります。
| 積分モード | やっていること | 効き方 |
|---|---|---|
| 垂直分割（perpendicular drop / drop line） | 2つの頂点のあいだの谷から、ベースラインまで垂直に線を下ろす | 谷より後ろの主ピークの裾が、まるごと不純物側に入る |
| 接線処理（tangent skim） | 主ピークの裾に接する直線を引き、その上だけを不純物とする | 不純物の裾のうち主ピーク側にかかる分を捨てる |
| 指数接線処理（exponential skim） | 直線ではなく指数曲線で主ピークの裾を近似する | 接線処理より裾の形に忠実になる |
| 谷-谷（valley to valley） | 谷とベースラインを結ばず、谷どうしを結んだ折れ線をベースラインにする | 谷の下にある面積をすべて捨てる |
ここで大事なのは、どれが「正しい」かという問いには答えがないということです。真の境界は存在しないのですから。あるのは「どれくらいずれるか」だけです。
同じピークを4通りに積分する ― 誤差 +4.2 % から −72.1 %
その「どれくらい」を実測した例が、2025年の Electrophoresis 誌の総説にあります。
Blanc T, Wätzig H, Sänger-van de Griend C. "Peak Integration of Electropherograms in GMP and Research Labs: Navigating Increased Scrutiny Amid Data Integrity Audits and Inspections." Electrophoresis 2025;46(9-10):653.
キャピラリー電気泳動（CE）の話ですが、扱っている問題はクロマトグラフィーとまったく同じです。主ピークと 0.100 area% の不純物が重なった同一のデータを、4つのモードで積分した結果が表2に載っています。
| 積分モード | 不純物ピーク面積 (mAU·s) | 不純物 (%) | 誤差 |
|---|---|---|---|
| A：垂直分割 | 10.1 | 0.104 | +4.2 % |
| B：接線処理 | 4.0 | 0.041 | −58.8 % |
| C：指数接線処理 | 6.9 | 0.071 | −28.8 % |
| D：谷-谷 | 2.7 | 0.028 | −72.1 % |
同じデータ、同じ不純物、同じ装置。違うのは積分モードだけです。それで 0.028 % と 0.104 %、3.7倍の開きが出ます。
規格が「個々の不純物 0.10 % 以下」だったら、モード A では不適合、モード D では余裕で合格です。合否が積分モードで決まっているわけです。
論文の図の説明はこう続きます。
モード (A)（垂直分割）は不純物を過大評価する。モード (B)（接線処理）、(C)（指数接線処理）、(D)（谷-谷）は過小評価する。分離度と主ピークのテーリングにもよるが、多くの場合 (A) か (C) が真値にいちばん近い。
そして、実務上いちばん重要な一文が続きます。
積分モードの適切な選択は、その手法の意図した目的による。もしこれが原薬または製剤の純度試験であるなら、不純物の過大評価が一般に患者にとって最も安全な選択である。
迷ったら過大評価側を選ぶ。これは科学的に「正しい」からではなく、間違えたときにどちらへ倒れるかを選ぶ、という判断です。純度試験でこの原則を明文化してある文献は多くありません。
垂直分割の誤差を計算してみる
「垂直分割は過大評価する」は、いつでも成り立つわけではありません。上の例は主ピークが強く裾を引いていた場合で、条件が変われば符号も変わります。分離度とピーク形状で誤差がどう動くのか、自分で計算しました。
モデル：等分散のガウスピーク2本。σ は共通。分離度は Rs ＝ Δtr ÷ (4σ)（ピーク幅を 4σ とする定義）。真の面積比を与え、2つの頂点のあいだの極小点（谷）で垂直に切ったとき、小さいほうのピークの測定面積が真の面積からどれだけずれるかを百分率で出します。裾引きはガウスに指数減衰を畳み込んだ EMG で表現し、USP のテーリングファクター T に換算しました。
まず対称なピーク（T ＝ 1.00）の場合です。この条件では、小ピークが先に出ても後に出ても誤差は同じになります。
| 分離度 Rs | 面積比 10 : 1 | 面積比 100 : 1 |
|---|---|---|
| 0.80 | 谷が立たない | 谷が立たない |
| 1.00 | −8.5 % | 谷が立たない |
| 1.25 | −1.4 % | −6.7 % |
| 1.50 | −0.2 % | −1.1 % |
| 2.00 | ±0.0 % | ±0.0 % |
読み方は次のとおりです。
- 符号は基本的にマイナス、つまり小ピークは過小評価される。主ピークが大きいほど谷が小ピーク側へ押しやられ、小ピークの面積が主ピーク側に取られるからです。
- Rs 1.5 を確保できていれば、対称ピークなら誤差は 1 % 前後。多くの公定法が Rs ≥ 1.5 を要求している理由が、ここに数字で出ます。
- Rs 1.0 では 10 : 1 でも 8.5 % ずれる。分離度をぎりぎりで通したメソッドは、面積の時点で数 % の系統誤差を持ち込んでいます。
次に、わずかに裾を引く場合（T ＝ 1.06、EMG の τ ＝ 0.5σ）です。ここからは、小ピークが主ピークの前に出るか後に出るかで挙動が変わります。
| 分離度 Rs | 10 : 1 小が先 | 10 : 1 小が後 | 100 : 1 小が先 | 100 : 1 小が後 |
|---|---|---|---|---|
| 1.00 | −16.0 % | −15.5 % | 谷が立たない | 谷が立たない |
| 1.25 | −4.2 % | −1.1 % | −13.3 % | 谷が立たない |
| 1.50 | −1.2 % | +0.4 % | −3.5 % | −2.7 % |
| 2.00 | −0.1 % | +0.1 % | −0.2 % | +0.2 % |
そしてもう少し裾を引く場合（T ＝ 1.23、τ ＝ 1.0σ）。
| 分離度 Rs | 10 : 1 小が先 | 10 : 1 小が後 | 100 : 1 小が先 | 100 : 1 小が後 |
|---|---|---|---|---|
| 1.00 | −31.0 % | 谷が立たない | 谷が立たない | 谷が立たない |
| 1.25 | −12.7 % | +2.9 % | −26.2 % | 谷が立たない |
| 1.50 | −5.9 % | +8.1 % | −11.1 % | 谷が立たない |
| 2.00 | −1.3 % | +3.2 % | −2.3 % | +7.9 % |
ここに、この記事でいちばん実務的な数字が出ています。
T ＝ 1.23 は、局方が普通に許容するテーリングです。多くの公定法のシステム適合性は T ≤ 1.5 や T ≤ 2.0 を要求しており、1.23 は何の問題もなく合格します。ところが同じ Rs 1.5 でも、
- 対称ピーク（T ＝ 1.00）なら 100 : 1 で −1.1 %
- T ＝ 1.23 なら 100 : 1・小が先で −11.1 %
テーリングが「合格範囲内」で少し増えただけで、積分誤差は約10倍になります。システム適合性は分離度とテーリングを別々にチェックしますが、面積の誤差はこの2つの積で効いてくるわけです。
そして符号にも注目してください。小ピークが主ピークより後に出る場合は、逆に過大評価に転じます（Rs 1.5・10 : 1 で +8.1 %）。谷より後ろに残った主ピークの裾が、まるごと小ピーク側に入るためです。冒頭の論文で「垂直分割は過大評価する」と書かれていたのは、この配置のことです。
同じ垂直分割という操作が、溶出順序ひとつで過小評価にも過大評価にもなる。不純物が主ピークの前に出るか後に出るかで、報告値の倒れる向きが変わります。
そもそも谷が立たない ― テーリングが効く場所
上の表に何度も出てきた「谷が立たない」は、単なる欠測ではありません。2つの頂点のあいだに極小点ができない＝小ピークが肩（ショルダー）にしかならない状態であり、このとき垂直分割という操作そのものが使えません。
谷が立つために必要な最小の分離度を、同じモデルで探索しました（0.05 刻み）。
| 条件 | 対称（T ＝ 1.00） | T ＝ 1.06 | T ＝ 1.23 |
|---|---|---|---|
| 10 : 1・小が先 | Rs ≥ 0.85 | 0.90 | 0.95 |
| 10 : 1・小が後 | Rs ≥ 0.85 | 1.00 | 1.20 |
| 100 : 1・小が先 | Rs ≥ 1.05 | 1.10 | 1.15 |
| 100 : 1・小が後 | Rs ≥ 1.05 | 1.30 | Rs ≥ 1.80 |
いちばん下の行が問題です。1 % レベルの不純物が、わずかに裾を引く（T ＝ 1.23）主ピークの後に溶出する場合、谷ができるには Rs 1.80 が必要になります。
つまり、システム適合性で Rs ≥ 1.5 を満たしていても、そのメソッドでは垂直分割が原理的に使えないということが起こりえます。この状況で CDS に自動積分させれば、ソフトは肩を検出できずに不純物を無視するか、無理に検出して不安定な結果を返します。ここが「手動で触りたくなる」典型的な場面であり、後半で見るように、査察がいちばん見る場面でもあります。
対処は積分側ではなく分離側にあります。選択肢は3つです。
- 分離度を上げる（グラジエントを緩める、カラムを変える）
- テーリングを減らす（→ HPLCトラブルシューティング の化学的原因・物理的原因の切り分け）
- 接線処理・指数接線処理に切り替え、その選択を手順書に書いて固定する
3番目を選ぶなら、前節の表のとおり過小評価側に倒れることを承知のうえで選ぶ必要があります。純度試験なら、それは患者側にとって安全でない方向です。
積分パラメータという「もうひとつのメソッド」
積分モードの手前に、そもそも「ピークを検出するかどうか」を決める設定群があります。多くのラボでこれはメソッドの一部として扱われていないか、扱われていても妥当性の根拠が残っていません。
前掲の Electrophoresis 総説は、主要な CDS（ChemStation / Chromeleon / Empower / 32 Karat）の積分機能を対照表にしています。名前は違っても役割は共通です。
| 役割 | よくある名称 | 何を決めているか |
|---|---|---|
| ピークの立ち上がりの検出 | スロープ感度 / Sensitivity / Liftoff Threshold | ベースラインの傾きがどれだけ変化したらピーク開始とみなすか |
| ピーク幅の想定 | Peak Width / Peak Slice / Auto Peak Width | 想定するピークの時間幅。ノイズの尖りと本物のピークを区別する第一の道具 |
| 小さすぎるものを捨てる | Area Reject / Minimum Area / Minimum Height | この面積・高さ未満は積分しない |
| 肩の扱い | Detect Shoulders / Shoulder Sensitivity | 肩をピークとして立てるかどうか |
| 重なりの分け方 | Force Drop Line / Tangent Skim / Valley to Valley | 前節の4モードの選択 |
| 積分の停止 | Integration Inhibit / Integration Off | 指定区間を積分しない |
総説はピーク幅について、Waters Empower の Auto Peak Width が「二次微分の最大高さの 5 %」の位置でピーク幅を決めていると具体的に書いています。名前が同じでも、ソフトによって計算の中身は違うということです。
データ収集側の条件も効きます。総説は 「ガウス形のピークを積分アルゴリズムが正確にフィットするには、およそ 20 点のデータ点が必要」 とし、非対称なピークではそれ以上必要だとしています。サンプリングレートは検出器の設定であって積分の設定ではありませんが、足りなければ積分では取り返せません。
CDS ベンダーの解説も、この設定が「決めごと」であることを隠していません。SCION Instruments の CompassCDS 解説は、しきい値をこう定義しています。
しきい値はベースラインのノイズとピークを分けるために使う。有効なピークとして識別されるために、ピークが持つべき最小の信号レベルを設定するものである。
「有効なピークとして識別されるために持つべき最小の信号レベル」を、人が数値で決めている。この数値を動かせば、検出されるピークの本数が変わります。総不純物量が変わります。
そして総説は、実務のジレンマをそのまま書いています。
理論上は、複数のランにわたって一貫した積分パラメータを使えるほど頑健なメソッドが理想であり、同じ積分パラメータをシーケンス内の全試料に適用すべきである。しかし（中略）複雑な試料マトリックスと難しい分離のため、ほとんどの手法はこの理想的な基準を満たしていない。
続く一文が、この記事の後半への橋渡しになります。
最終的には、自動で誤って積分するよりも、正しく積分することのほうが重要である。
正しく積分するために触る。触ったら記録する。この順序が守られているかどうかが、査察で見られています。
局方は何を書いていて、何を書いていないか
意外に思われるかもしれませんが、薬局方は積分についてほとんど何も書いていません。
前掲の総説がまとめている範囲では、こうです。
- 欧州薬局方および日本薬局方は「データ処理装置を用いて検出器からの信号をピーク面積として測定する」と規定しているにとどまる。
- USP は、主ピークから完全には分離していない不純物のピーク面積について、接線処理（tangential skimming）で積分することを推奨している。
- USP はまた、適切な報告閾値と、ピーク面積を積分する条件を決めることの重要性を指摘している。とくに、類縁物質試験で総不純物の限度値を設けている場合や、不純物の定量分析が要求される場合に重要である。
WHO の技術報告書「Good Chromatography Practices」はもう少し踏み込んでいます。総説の要約によれば、正確な積分のためには完全に分離したピークが不可欠であるとしたうえで、分離しきらない場合には健全な積分手法を用いることを推奨し、手動積分は例外的な場合に限り、適切な記録と承認があることを条件として許されると述べています。
ただし総説は、これらのガイダンスに率直な批判も加えています。
これらのガイドラインは「対称なピーク」と「完全に分離したピーク」という理想的なクロマトグラフィーを前提としているように見える。しかし、タンパク質のような生体高分子の分離や CE 分離に内在する難しさを考慮していない。
「完全に分離せよ」は指示ではなく前提になっており、分離しなかったときにどうするかが空白のまま残されている ―― これが積分という領域の現状です。空白は、各ラボが自分の手順書で埋めるしかありません。
なお、日本薬局方一般試験法〈2.00〉クロマトグラフィー総論の改正内容（SN比のノイズ測定範囲の変更、条件の調整が許される範囲）は別記事にまとめています → JP19 クロマトグラフィー総論〈2.00〉。
手動積分はなぜ査察で狙われるのか
空白があり、そこを人が埋め、しかも埋め方によって合否が変わる。この構造は、規制当局から見ればデータ操作の入口です。実際、手動積分は近年のウォーニングレターで名指しされています。
Unipack LLC（ウォーニングレター 320-26-32、2025年12月19日）
米ニュージャージー州の製造所に対する、2025年6月の査察を受けたものです。「Manual Integration」という見出しが立っています。
貴社の分析者は、科学的正当化も手順上の管理もないまま HPLC 定量ピークの手動積分を行っていた。たとえば、（略）坐剤の安定性ロットのクロマトグラムを確認したところ、HPLC 定量試験の対象主ピークについて一貫しない積分が使われていた。この一貫しない HPLC ピークの積分は、定量分析に適さない。
さらに、積分を「しない」ことも指摘されています。
複数の医薬品の HPLC クロマトグラムにおいて、未知ピークが積分されず、適切に調査もされていなかった。（略）同じ製品について、（略）のあいだの保持時間についてピークの積分を抑止（inhibit）していた。ピーク積分の抑止と積分パラメータの制限は、データ操作を防ぐため、科学的に正当化され、バリデートされた方法の中に文書化されていなければならない。
「積分しない区間を指定する」機能（Integration Inhibit）は、どの CDS にもある正規の機能です。溶媒ピークや既知のシステムピークを外すために使います。問題は機能そのものではなく、それがメソッドに書かれていないことです。
Nortec Quimica SA（ウォーニングレター 320-23-07、2022年12月8日）
ブラジルの原薬製造所に対するもので、こちらは品質部門（QU）のレビューが論点です。
貴社の QU は、各試験で生成された生データの完全な記録をクロマトグラフィーシステムのソフトウェア内でレビューしていなかった。たとえば QU は、適切な方法が使われたか、シーケンスが正しく設定されたか、そして手動積分が適切に行われたかを確認するために、システム内のデータおよび該当する監査証跡をレビューしていなかった。
FDA が求めた是正措置には、次の2つが含まれています。
・手動積分の手順が、QU が承認し監督する手順書に従って、定義された限定的な状況でのみ行われることを保証する管理策の概要。 ・米国市場向け製品の（略）手動積分の全事例の包括的なレビュー。使用した手動積分パラメータの科学的正当化を提出すること。正当化を欠く積分については、適切な再積分パラメータによる再積分の計画を示すこと。
読み取るべきは、「手動積分をするな」とは書かれていないという点です。求められているのは、限定された条件・承認された手順・科学的正当化・監督という4点セットです。手動積分そのものは違反ではありません。根拠を残さない手動積分が違反です。
「生データ」を定義するとき、規制当局はクロマトグラムのベースラインを例に出す
ここまでは「積分をどう管理するか」でした。しかし規制側の関心は、実はもう一段深いところにあります。
英国 MHRA の『GXP データインテグリティ・ガイダンスおよび定義』（Revision 1、2018年3月）は、「原記録（original record）」を静的（static）と動的（dynamic）に分けて説明する際、例としてクロマトグラフィーを使っています。
静的な記録形式とは、紙または電子的な記録のように固定されており、利用者と記録内容のあいだにほとんど、あるいはまったく相互作用がないものである。たとえば、いったん印刷されるか静的な電子形式に変換されると、クロマトグラフィーの記録は再処理する能力や、ベースラインをより詳細に見る能力を失う。 動的な形式の記録は（中略）電子記録として保持されたクロマトグラフィーの記録は、（適切なアクセス権限を持つ）利用者やレビュアーがデータを再処理し、ベースラインを拡大して積分をより明確に見ることを可能にする。
「生データとは何か」を説明するために選ばれた例が、クロマトグラムのベースラインなのです。紙に印刷したクロマトグラムは生データではない ―― その理由は、そこでは積分をやり直せないから。積分が判断であることを、規制の定義そのものが前提にしています。
同ガイダンスの 6.9「データ処理」も、そのまま積分の話として読めます。
データ処理に用いられたユーザー定義のパラメータについて、生データまでの十分な追跡可能性が必要であり、誰がその作業を行ったかの帰属も含む。監査証跡と保持される記録は、その処理の出力がのちに報告されたか否かにかかわらず、すべてのデータ処理活動を再構成できるものでなければならない。処理パラメータを段階的に変えながらデータ処理が繰り返された場合、それが見えるようになっていなければならない。これは、より望ましい結果を得るために処理パラメータが操作されていないことを保証するためである。
最後の一文が核心です。積分パラメータを少しずつ変えて「いい結果」に近づけていく操作は、1回ごとに見れば正当な調整に見えます。それが軌跡として見えることを要求している。1回の積分の妥当性ではなく、何回やり直したかとその経過が問われています。
6.10「データの除外」も同じ思想です。
データは、測定・採取・取得された量を代表していないことが妥当な科学的正当化によって示せる場合にのみ、除外してよい。（中略）除外されたものも含め、すべてのデータは元のデータセットとともに保持され、その除外の判断の妥当性が確認できる形式でレビューできなければならない。
なお、ALCOA と ALCOA+ の関係について MHRA は 3.10 で明快に整理しています ——「本ガイダンスは ALCOA+ ではなく ALCOA という略語を用いる。（中略）どちらの略語を使っても期待に違いはない」。用語の議論に時間を使う必要はない、ということです。
バイオアナリシスでは再積分を報告書に載せる
医薬品開発の一分野では、この要求がすでに具体的な提出物として制度化されています。ICH M10（バイオアナリシス法バリデーションおよび試験試料分析、2022年5月24日 Step 4）には、3.3.6「クロマトグラムの積分」という独立した項があります。
クロマトグラムの積分および再積分は、試験計画書、プロトコール、または SOP に記載すべきである。あらかじめ記載された手順からの逸脱は、バイオアナリシス報告書で議論すべきである。再積分を要したクロマトグラムのリスト（手動積分を含む）と、再積分の理由をバイオアナリシス報告書に含めるべきである。元のクロマトグラムと再積分後のクロマトグラム、および最初の積分結果と再積分結果は、将来の参照のために保管し、生物学的同等性試験についてはバイオアナリシス報告書に添付して提出すべきである。
再積分したという事実そのものが、提出物になる。「何回やり直したかが見えなければならない」という MHRA の要求が、ここでは「リストにして出せ」という形になっています。
M10 の全体像（旧2通知の廃止、移行期間、判定基準）は別記事にまとめています → ICH M10バイオアナリシス実務。
分析者の視点
現場に落とすと、この順序になります。
- 積分は分離の下流にあることを忘れない。谷が立たないのは積分の問題ではなく分離の問題です。前掲の表のとおり、100 : 1 の不純物が T ＝ 1.23 の主ピークの後に出るなら、Rs 1.8 なければ垂直分割は成立しません。まず分離を直す。
- メソッド開発の段階で積分モードを決め、手順書に書く。「どのモードを使うか」は分析条件です。カラムや移動相と同じ扱いにしてください。決めておけば、日常試験で判断する必要がなくなります。
- 純度試験では、迷ったら過大評価側に倒す。科学的に正しいからではなく、間違えたときの向きを患者側の安全に合わせるためです。
- 積分パラメータ（スロープ感度・ピーク幅・面積リジェクト・積分抑止区間）を、メソッドの一部として文書化する。とくに積分抑止区間は、書かずに使うとウォーニングレターの表現がそのまま当てはまります。
- サンプリングレートを先に確認する。ピークあたり 20 点が目安で、非対称なピークではもっと要ります。データ点が足りなければ、積分でどう頑張っても取り返せません。
- 手動積分は、禁止ではなく「限定・承認・正当化・監督」の4点セットで運用する。FDA が求めたのはまさにこれです。
- やり直した経過を残す。MHRA が見るのは最終結果ではなく、そこに至るまでの軌跡です。
やってはいけないことを3つ挙げます。
- 同じシーケンス内で試料ごとに積分を変え、その理由を残さない。「一貫しない積分は定量分析に適さない」という指摘が、そのまま該当します。
- 積分抑止をメソッドに書かずに使う。正規の機能ですが、書いていなければ「制限」に見えます。
- 紙に印刷したクロマトグラムを生データとして保管する。MHRA の定義では、それは生データではありません。ベースラインを拡大できないからです。
まとめ
クロマトグラムの積分は、信号を読み取る作業ではなく、存在しない境界を引く決定です。
決定である以上、決め方で数字が変わります。同じ 0.100 % の不純物が、積分モードしだいで 0.028 % にも 0.104 % にもなる。垂直分割の誤差は、対称なピークが Rs 1.5 で分かれていれば 1 % 程度ですが、局方が許容する範囲のテーリング（T ＝ 1.23）が加わるだけで 11 % に増え、溶出順序が変われば符号まで変わります。そもそも谷が立たず、垂直分割が使えない条件も珍しくありません。
規制側はこの構造を正確に理解しています。だから MHRA は「生データとは何か」を説明するのにクロマトグラムのベースラインを例に使い、ICH M10 は再積分のリストを提出物にし、FDA は手動積分を見出しに立てて指摘します。積分が判断であることを、規制の側が前提にしている。
分析者の仕事は、その判断をあらかじめ決めておくことと、やり直したら残すことの2つに尽きます。総説の一文をもう一度引きます ——「自動で誤って積分するよりも、正しく積分することのほうが重要である。」
未確認・限界
- 本記事の誤差の表2つ（垂直分割の誤差／谷が立つ最小 Rs）は、編集側が数値計算したもので、文献値ではありません。モデルは「等分散のガウス（またはガウス×指数減衰の EMG）2本」という理想化で、実際のクロマトグラフィーではピークごとに σ が違い、ベースラインにはノイズとドリフトがあります。傾向と桁を示すものとして読んでください。なお 1 : 1 の対称ピークで誤差が 0.0 % になることを確認して、計算の妥当性を点検しています。
- Electrophoresis 総説の表2は、公表されている見出し自体に誤記があります。4列目の見出しが3列目と同じ「C—Exponential Skim」になっていますが、図の説明文が4つのモードを (A) 垂直分割・(B) 接線処理・(C) 指数接線処理・(D) 谷-谷と明記しており、誤差の符号（+4.2 / −58.8 / −28.8 / −72.1）とも整合するため、本記事では4列目を (D) 谷-谷として扱いました。
- FDA のウォーニングレター2件は、編集側の環境から fda.gov に直接アクセスできませんでした（403）。逐語引用はディープリサーチが取り込んだ fda.gov のページから取り出したものです。文書番号・日付・指摘の主題は別経路のウェブ検索で一致を確認していますが、引用文そのものを一次サイトで再確認できていません。原文は上記 URL で参照してください。
- 欧州薬局方・日本薬局方・USP・WHO の記述は、Electrophoresis 総説による要約と引用を通じて把握したものです。USP と Ph. Eur. の該当章は有償で、編集側で原文を確認できていません。日本薬局方〈2.00〉のみ原文を確認済み（別記事参照）。
- 積分アルゴリズムの内部実装（Empower の ApexTrack、ChemStation の各種アルゴリズム）はベンダー固有で、完全な仕様は公開されていません。本記事に挙げた「二次微分の最大高さの 5 %」も総説の記述によるもので、Waters の一次資料では確認していません。
用語集
| 用語 | 意味 |
|---|---|
| ベースライン | ピークがない状態の信号レベル。積分ではピークの下に引く基準線を指す。 |
| 垂直分割（perpendicular drop） | 重なった2ピークを、谷からベースラインへ垂直に下ろした線で分ける方法。 |
| 接線処理（tangent skim） | 主ピークの裾に接する線を引き、その上の面積だけを小ピークとする方法。 |
| 谷-谷（valley to valley） | 谷どうしを結んだ折れ線をベースラインとする方法。谷の下の面積は捨てられる。 |
| 積分抑止（integration inhibit） | 指定した時間区間を積分対象から外す CDS の機能。 |
| スロープ感度 | ベースラインの傾きがどれだけ変化したらピーク開始とみなすかを決める設定。 |
| 面積リジェクト | この面積未満のピークは報告しない、というしきい値。 |
| 分離度 Rs | 隣り合う2ピークの分かれ具合。本記事では Rs ＝ Δtr ÷ (4σ)。 |
| テーリングファクター T | ピークの裾の引き方の指標。USP では高さ 5 % 位置の全幅を、前縁から頂点までの距離の2倍で割る。対称なら 1.00。 |
| EMG（指数変形ガウス） | ガウス関数に指数減衰を畳み込んだ、テーリングを表す標準的なピークモデル。 |
| 報告閾値 | これを超えた不純物は報告する、という濃度比のしきい値。 |
| 生データ（raw data） | 情報が最初に捕捉された記録。MHRA の定義では、動的に取得されたものは動的なまま保持される必要がある。 |
| 監査証跡（audit trail） | 電子記録の作成・変更・削除を再構成できる、安全で時刻印のある自動記録。 |
| ALCOA / ALCOA+ | データが備えるべき属性。帰属性・判読性・同時性・原本性・正確性（＋完全・一貫・永続・利用可能）。 |
| 再積分（reintegration） | いったん積分した結果を、パラメータを変えて処理し直すこと。 |
出典
- Blanc T, Wätzig H, Sänger‐van de Griend C. "Peak Integration of Electropherograms in GMP and Research Labs: Navigating Increased Scrutiny Amid Data Integrity Audits and Inspections." Electrophoresis 2025;46(9-10):653. doi:10.1002/elps.70002 https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC12366258/
- MHRA. "'GXP' Data Integrity Guidance and Definitions; Revision 1: March 2018."（6.9 データ処理／6.10 データの除外／6.11.1 原記録／3.10 ALCOA） https://assets.publishing.service.gov.uk/media/5aa2b9ede5274a3e391e37f3/MHRA_GxP_data_integrity_guide_March_edited_Final.pdf
- ICH. "M10 Bioanalytical Method Validation and Study Sample Analysis" Step 4, 2022-05-24（3.3.6 Integration of Chromatograms）. https://database.ich.org/sites/default/files/M10_Guideline_Step4_2022_0524.pdf
- U.S. FDA. Warning Letter 320-26-32, Unipack LLC（South Plainfield, NJ）, 2025-12-19. https://www.fda.gov/inspections-compliance-enforcement-and-criminal-investigations/warning-letters/unipack-llc-716621-12192025
- U.S. FDA. Warning Letter 320-23-07, Nortec Quimica SA（Duque de Caxias, Rio de Janeiro, Brazil）, 2022-12-08. https://www.fda.gov/inspections-compliance-enforcement-and-criminal-investigations/warning-letters/nortec-quimica-sa-639894-12082022
- SCION Instruments. "Good Integration"（CompassCDS のピーク幅・しきい値の定義）. https://scioninstruments.com/us/blog/good-integration/
- 第十九改正日本薬局方 一般試験法 2.00 クロマトグラフィー総論（厚生労働省）※ 本記事では〈2.00〉の内容は別記事に譲り、SN比・条件調整の詳細はそちらを参照。
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制作メモ：本記事はディープリサーチ（NotebookLM）で一次情報候補を収集し、主要な主張・数値・出典を編集側で原著にあたって検証したうえで執筆しています。誤差の2つの表は編集側の数値計算によるもので、モデルと条件を本文に明記しました。fda.gov は編集側から直接開けないため、逐語引用の扱いは「未確認・限界」に記載しています。
